Adv Sci . | PBLD 調(diào)控 STING 介導(dǎo)的抗病毒固有免疫應(yīng)答與自身免疫性疾病

精確調(diào)控STING的表達(dá)對(duì)于維持免疫穩(wěn)態(tài)、預(yù)防自身免疫性疾病至關(guān)重要。本研究發(fā)現(xiàn)，含吩嗪生物合成樣結(jié)構(gòu)域蛋白（PBLD）通過(guò)抑制含CCDC50介導(dǎo)的STING 選擇性自噬降解，成為 STING 依賴(lài)性抗病毒 I 型干擾素應(yīng)答的關(guān)鍵調(diào)控因子。值得注意的是，病毒感染通過(guò)兩種不同機(jī)制下調(diào) PBLD 表達(dá)：一是通過(guò)降低轉(zhuǎn)錄因子TFEB活性抑制其轉(zhuǎn)錄，二是通過(guò)增強(qiáng)MARCH2介導(dǎo)的泛素 - 蛋白酶體途徑促進(jìn)翻譯后降解。這些機(jī)制共同構(gòu)成負(fù)反饋環(huán)路，助力病毒免疫逃逸。此外，與野生型（WT）同窩小鼠相比，Pbld 缺陷小鼠對(duì)人腺病毒4型（HAdV-4）感染的易感性顯著增加。重要的是，在 TMPD誘導(dǎo)的狼瘡小鼠模型中，Pbld缺陷可降低 STING 表達(dá)并減輕自身免疫表型。臨床層面，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的 PBLD 表達(dá)升高，且與 STING 驅(qū)動(dòng)的 I 型IFN 信號(hào)呈正相關(guān)。綜上，PBLD 在 STING 介導(dǎo)的抗皰疹病毒固有免疫及自身免疫中發(fā)揮雙重作用，其有望成為抗病毒感染和自身免疫性疾病的治療靶點(diǎn)。

研究結(jié)果一：PBLD缺陷減弱cGAS-STING介導(dǎo)的抗病毒免疫應(yīng)答

為明確PBLD是否調(diào)控cGAS-STING介導(dǎo)的信號(hào)通路，本研究在HeLa細(xì)胞沉默及在MDBK細(xì)胞敲除實(shí)驗(yàn)，探究其在DNA病毒或DNA模擬物觸發(fā)的I型IFN應(yīng)答中的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HAdV-4感染或DNA模擬物轉(zhuǎn)染后，沉默PBLD的HeLa細(xì)胞中I型IFN（IFNA、IFNB）和ISGs（ISG15、IFITM3、MX1）的mRNA表達(dá)顯著下調(diào)。一致地，BoHV-1感染后，PBLD敲除MDBK細(xì)胞中I型IFN和ISGs的mRNA表達(dá)也有所降低。此外，在HAdV-4或BoHV-1感染條件下，PBLD敲低/敲除可分別上調(diào)HAdV-4五鄰體基底（Pb）和BoHV-1 gE的 mRNA表達(dá)，表明PBLD缺陷會(huì)損害DNA病毒誘導(dǎo)的I型IFN應(yīng)答并促進(jìn)DNA病毒復(fù)制。

為進(jìn)一步探究PBLD在原代細(xì)胞cGAS-STING信號(hào)通路中的調(diào)控作用，本研究從Pbld缺陷小鼠和WT小鼠中分離出小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEFs）、腹腔巨噬細(xì)胞（PMs）和骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞（BMDMs）。HAdV-4感染或DNA模擬物刺激后，Pbld缺陷MEFs中Ifna4、Ifnb和ISGs（Isg15、Ifitm3、Mx1）的表達(dá)顯著降低，且HAdV-4病毒基因的表達(dá)較WT對(duì)照組上調(diào)。在HAdV-4感染的Pbld缺陷PMs和BMDMs中，也觀察到類(lèi)似的I型IFN應(yīng)答受損和病毒基因表達(dá)增加現(xiàn)象。綜上，這些結(jié)果表明PBLD在永生化細(xì)胞和原代細(xì)胞中均能促進(jìn)cGAS-STING信號(hào)通路激活。

研究結(jié)果二：Pbld缺陷小鼠對(duì)HAdV-4感染的易感性顯著增加

為探究Pbld在體內(nèi)抗病毒免疫中的生理和病理作用，本研究對(duì)Pbld敲除小鼠和WT小鼠進(jìn)行鼻內(nèi)HAdV-4感染，并開(kāi)展綜合分析。HAdV-4感染后，與WT小鼠相比，Pbld缺陷小鼠血清中IFN-β的產(chǎn)生水平更低。感染24小時(shí)后，Pbld缺陷小鼠肺、肝、脾中Ifna4、Ifnb和ISGs（Isg15、Ifitm3、Mx1）的轉(zhuǎn)錄水平較WT小鼠顯著降低，而病毒載量則顯著升高。一致地，Pbld缺陷小鼠肺、肝、脾中HAdV-4的半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量（TCID??）也顯著高于對(duì)照組小鼠。此外，Pbld缺陷小鼠對(duì)HAdV-4誘導(dǎo)的致死性更為敏感。組織學(xué)分析顯示，HAdV-4感染的Pbld缺陷小鼠肺泡、細(xì)支氣管和氣管的蘇木精-伊紅（H&E）染色結(jié)果顯示，其組織損傷和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)更為嚴(yán)重。綜上，這些結(jié)果表明PBLD在體內(nèi)宿主抵御DNA病毒感染中不可或缺。

研究結(jié)果三：PBLD通過(guò)抑制CCDC50依賴(lài)性自噬降解穩(wěn)定STING

為闡明PBLD激活cGAS-STING通路的分子機(jī)制，本研究首先探究了其對(duì)cGAS和STING穩(wěn)定性的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HAdV-4感染時(shí)，PBLD過(guò)表達(dá)可上調(diào)STING表達(dá)但不影響cGAS表達(dá)，而PBLD敲低則產(chǎn)生相反效果。在單純皰疹病毒1型（HSV-1）感染中，PBLD過(guò)表達(dá)或敲低也分別上調(diào)或下調(diào)STING蛋白表達(dá)。在HAdV-4或HSV-1感染的Pbld缺陷MEFs，以及HAdV-4感染的PMs和BMDMs中，也觀察到一致的結(jié)果。盡管RT-qPCR分析顯示HAdV-4或HSV-1感染后，PBLD可調(diào)控TMEM173（STING）的mRNA水平，但環(huán)己酰亞胺（CHX）追蹤實(shí)驗(yàn)表明，PBLD敲除細(xì)胞中STING的降解速率較WT細(xì)胞增加，提示PBLD可穩(wěn)定STING蛋白。這些結(jié)果表明PBLD在 mRNA和蛋白水平均能調(diào)控STING。

鑒于STING在調(diào)控cGAS-STING信號(hào)動(dòng)態(tài)中的起重要作用，本研究利用藥物抑制劑進(jìn)一步探究PBLD調(diào)控STING蛋白穩(wěn)定性的機(jī)制。藥物阻斷實(shí)驗(yàn)顯示，自噬抑制劑氯喹（CQ）可有效阻止PBLD缺失情況下的STING降解，而泛素-蛋白酶體抑制劑MG132或半胱天冬酶抑制劑Z-VAD-FMK則無(wú)此效果。此外，免疫熒光實(shí)驗(yàn)表明，PBLD敲除可增強(qiáng)STING向溶酶體的定位，提示PBLD缺陷主要通過(guò)自噬溶酶體途徑促進(jìn)STING降解。在自噬受損的自噬相關(guān)基因7敲除（ATG7-KO）HeLa細(xì)胞中，PBLD缺失情況下STING蛋白水平仍保持穩(wěn)定，表明PBLD可抑制STING的自噬降解。

近期研究表明，自噬受體在調(diào)控選擇性自噬降解中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在cGAS-STING通路中，包括SQSTM1/p62和CCDC50在內(nèi)的多種自噬銜接蛋白已被證實(shí)可調(diào)控STING。為明確PBLD是否通過(guò)這些自噬受體調(diào)控STING降解，本研究進(jìn)行了免疫共沉淀（co-IP）分析，結(jié)果顯示PBLD過(guò)表達(dá)可顯著破壞STING與自噬受體CCDC50的結(jié)合，而對(duì)SQSTM1/P62無(wú)影響；相反，PBLD敲除則產(chǎn)生相反效果。HAdV-4感染后，PBLD敲除細(xì)胞中CCDC50與STING的共定位較對(duì)照組增加。此外，在HAdV-4和HSV-1感染的PBLD敲低細(xì)胞中，CCDC50敲除可阻斷STING降解并增強(qiáng)IRF3磷酸化。綜上，這些結(jié)果表明PBLD通過(guò)功能性拮抗CCDC50介導(dǎo)的自噬降解，穩(wěn)定STING蛋白。

研究結(jié)果四：PBLD減弱STING在K150位點(diǎn)的K48連接多泛素化

泛素鏈與底物的結(jié)合已被證實(shí)是自噬受體識(shí)別的信號(hào)。本研究推測(cè)PBLD可能通過(guò)影響STING的泛素化，進(jìn)而調(diào)控其后續(xù)的CCDC50依賴(lài)性降解。為驗(yàn)證這一假設(shè)，本研究探究了PBLD調(diào)控的特定泛素連接類(lèi)型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PBLD過(guò)表達(dá)可特異性降低STING的總泛素化和K48連接泛素化（僅K48泛素突變體），而對(duì)其他泛素連接類(lèi)型（K6、K11、K27、K29、K33或K63僅泛素突變體）無(wú)影響。相反，PBLD敲除可增加STING的K48連接多泛素化，但不影響K63連接修飾。值得注意的是，病毒感染可增加STING的K48連接泛素化，且這種效應(yīng)在PBLD缺陷細(xì)胞中進(jìn)一步增強(qiáng)。

鑒于PBLD并非E3泛素連接酶，且免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明PBLD與STING之間無(wú)相互作用，本研究推測(cè)可能存在特定的中間分子介導(dǎo)STING的泛素化。為此，本研究在PBLD敲除和對(duì)照細(xì)胞系中進(jìn)行了免疫沉淀聯(lián)合質(zhì)譜分析，篩選出10個(gè)潛在的STING細(xì)胞相互作用因子。其中，本研究選擇了泛素A-52殘基核糖體蛋白融合產(chǎn)物1（UBA52），因其與泛素信號(hào)密切相關(guān)，可能在PBLD敲除后通過(guò)自噬調(diào)控STING降解。此外，HSV-1感染時(shí)，UBA52敲除可恢復(fù)PBLD敲低細(xì)胞中的STING蛋白水平。PBLD過(guò)表達(dá)可減弱STING與UBA52的相互作用，而PBLD敲除則產(chǎn)生相反效果，提示PBLD通過(guò)抑制UBA52與STING的結(jié)合，負(fù)向調(diào)控STING的自噬降解。

為進(jìn)一步探究PBLD在UBA52介導(dǎo)的STING泛素化和降解中的調(diào)控作用，本研究構(gòu)建了包含N端泛素結(jié)構(gòu)域或C端核糖體蛋白L40（RPL40）的UBA52截短體。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)顯示，UBA52的N端泛素結(jié)構(gòu)域可特異性結(jié)合STING，而C端RPL40結(jié)構(gòu)域則不能，提示UBA52來(lái)源的泛素可能修飾STING。正如預(yù)期，PBLD敲除或敲低可在UBA52過(guò)表達(dá)情況下顯著增加STING的泛素化，而UBA52缺陷則可減弱這種效應(yīng)。為證實(shí)泛素來(lái)源于UBA52的切割，本研究構(gòu)建了在泛素C端75/76位甘氨酸（G）突變?yōu)楸彼幔ˋ）的切割抗性（CR）UBA52表達(dá)載體（GFP-UBA52G75/76A）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PBLD敲除可增強(qiáng)WT UBA52表達(dá)細(xì)胞中STING的泛素化，但對(duì)CR突變體表達(dá)細(xì)胞無(wú)此效果，證實(shí)UBA52蛋白水解產(chǎn)生的泛素對(duì)STING修飾至關(guān)重要。

隨后，本研究利用UbPred算法預(yù)測(cè)STING上的潛在泛素化位點(diǎn)，并構(gòu)建了在三個(gè)潛在泛素化位點(diǎn)（K20、K137、K150）賴(lài)氨酸（K）突變?yōu)榫彼幔≧）的STING突變體。在PBLD缺陷HeLa細(xì)胞中，K150突變（而非K20或K137突變）可消除PBLD敲低誘導(dǎo)的STING降解。值得注意的是，在HAdV-4感染的PBLD敲除細(xì)胞系中，UBA52可進(jìn)一步增強(qiáng)WT STING和STING K20R/K137R突變體的降解，但對(duì)STING K150R突變體無(wú)此效果，提示STING的K150是其K48連接泛素化所必需的。綜上，PBLD通過(guò)抑制UBA52介導(dǎo)的STING在K150位點(diǎn)的K48連接泛素化，抑制STING的自噬降解。

研究結(jié)果五：PBLD通過(guò)減弱CCDC50識(shí)別的STING降解，促進(jìn)STING介導(dǎo)的免疫應(yīng)答

基于CCDC50敲除可消除PBLD敲低誘導(dǎo)的STING降解這一觀察結(jié)果，本研究推測(cè)UBA52介導(dǎo)的泛素化可能為CCDC50提供識(shí)別信號(hào)。為驗(yàn)證這一假設(shè)，本研究分析了UBA52對(duì)STING與CCDC50相互作用的影響。PBLD敲低細(xì)胞中的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)顯示，UBA52過(guò)表達(dá)可增強(qiáng)STING與CCDC50的結(jié)合，而UBA52敲除則減弱這種相互作用。此外，在PBLD缺陷細(xì)胞中，UBA52過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)的STING降解可被自噬抑制劑CQ逆轉(zhuǎn)，但泛素-蛋白酶體抑制劑MG132無(wú)此效果，表明UBA52在STING自噬降解中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

隨后，本研究探究了CCDC50在UBA52介導(dǎo)的STING降解中的作用。PBLD敲低細(xì)胞中，UBA52過(guò)表達(dá)可進(jìn)一步促進(jìn)STING降解，而CCDC50敲除則可消除這種效應(yīng)。此外，本研究探究了CCDC50介導(dǎo)的STING降解是否參與抗病毒免疫。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，UBA52過(guò)表達(dá)（單獨(dú)或與CCDC50聯(lián)合）可下調(diào)I型IFN和ISGs的表達(dá)，但在CCDC50敲除細(xì)胞中無(wú)此效果。這些結(jié)果表明PBLD通過(guò)抑制CCDC50介導(dǎo)的STING自噬降解，促進(jìn)cGAS-STING信號(hào)激活。

利用重組WT STING或突變體STING（STING K150R）的STING敲除HeLa細(xì)胞系，本研究觀察到PBLD敲低情況下，UBA52和CCDC50可協(xié)同促進(jìn)WT STING降解，但對(duì)STING K150R突變體無(wú)此效果，提示PBLD以K150依賴(lài)的方式靶向并穩(wěn)定STING。功能分析進(jìn)一步顯示，在UBA52和CCDC50存在的情況下，與WT STING相比，STING K150R突變體無(wú)法影響HAdV-4誘導(dǎo)的I型IFN應(yīng)答。一致地，PBLD敲除可增強(qiáng)WT STING與CCDC50的相互作用，但對(duì)STING K150R突變體的影響極小。綜上，這些結(jié)果表明PBLD可有效抑制UBA52介導(dǎo)的STING在K150位點(diǎn)的K48連接泛素化，從而阻止STING降解，最終維持STING介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。

研究結(jié)果六：病毒感染通過(guò)TFEB和MARCH2下調(diào)PBLD表達(dá)

前期研究表明，某些RNA病毒感染可下調(diào)PBLD表達(dá)。為拓展這一發(fā)現(xiàn)，本研究探究了DNA病毒感染對(duì)PBLD表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HSV-1和HAdV-4感染可在 mRNA和蛋白水平下調(diào)PBLD表達(dá)。鑒于TFEB在調(diào)控PBLD轉(zhuǎn)錄中的已知作用，本研究探究了DNA病毒感染過(guò)程中TFEB的動(dòng)態(tài)變化。值得注意的是，HSV-1和HAdV-4感染均可在mRNA和蛋白水平抑制TFEB表達(dá)。此外，無(wú)論是否存在病毒感染，TFEB敲低均可下調(diào)PBLD的mRNA和蛋白表達(dá)，而TFEB過(guò)表達(dá)則產(chǎn)生相反效果。這些結(jié)果表明，TFEB介導(dǎo)的PBLD轉(zhuǎn)錄調(diào)控是病毒感染進(jìn)一步下調(diào)TFEB表達(dá)、進(jìn)而抑制PBLD轉(zhuǎn)錄的共同機(jī)制。

DNA病毒感染細(xì)胞中PBLD蛋白水平也顯著降低。環(huán)己酰亞胺（CHX）追蹤實(shí)驗(yàn)顯示，HSV-1或HAdV-4感染可增強(qiáng)HeLa細(xì)胞中PBLD的降解。為明確這一效應(yīng)的主要降解途徑，本研究利用針對(duì)不同降解途徑的抑制劑檢測(cè)PBLD蛋白水平。Westernblot分析顯示，泛素-蛋白酶體抑制劑MG132可恢復(fù)HAdV-4或HSV-1感染后的PBLD水平，而自噬抑制劑（CQ）和半胱天冬酶抑制劑（Z-VAD-FMK）則無(wú)此效果，提示泛素-蛋白酶體途徑參與這一過(guò)程。

前期研究報(bào)道，E3連接酶MARCH2在病毒感染過(guò)程中可作為MAVS和NF-κB介導(dǎo)信號(hào)的負(fù)調(diào)控因子，其與PBLD在MAVS和NF-κB介導(dǎo)的固有免疫應(yīng)答中的正向調(diào)控作用呈負(fù)相關(guān)。因此，本研究推測(cè)MARCH2可能參與調(diào)控PBLD表達(dá)。隨后，分子對(duì)接預(yù)測(cè)了MARCH2與PBLD之間的相互作用。DNA病毒感染可在mRNA和蛋白水平顯著上調(diào)MARCH2表達(dá)。此外，MARCH2過(guò)表達(dá)可降低PBLD蛋白表達(dá)，而siRNA介導(dǎo)的MARCH2敲低則產(chǎn)生相反效果。為闡明MARCH2與PBLD之間的機(jī)制關(guān)聯(lián)，本研究探究了MARCH2在調(diào)控PBLD穩(wěn)定性中的作用。DNA病毒感染可促進(jìn)PBLD的K48連接泛素化，且MARCH2過(guò)表達(dá)可進(jìn)一步增強(qiáng)這種泛素化，但對(duì)K63連接泛素化無(wú)影響，提示MARCH2可能通過(guò)介導(dǎo)PBLD的K48連接多泛素化促進(jìn)其降解。一致地，RNA病毒感染也可在轉(zhuǎn)錄和蛋白水平下調(diào)TFEB并上調(diào)MARCH2表達(dá)。這些結(jié)果表明，DNA和RNA病毒感染均通過(guò)抑制TFEB表達(dá)下調(diào)PBLD轉(zhuǎn)錄，同時(shí)通過(guò)上調(diào)MARCH2介導(dǎo)的泛素-蛋白酶體途徑促進(jìn)PBLD降解。

研究結(jié)果七：PBLD缺陷減輕TMPD誘導(dǎo)的小鼠狼瘡模型中的自身免疫

越來(lái)越多的證據(jù)表明，cGAS-STING信號(hào)通路的異常激活在SLE的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。鑒于PBLD在調(diào)控STING介導(dǎo)的I型IFN信號(hào)中的重要作用，本研究探究了PBLD是否參與SLE的發(fā)病機(jī)制。為明確PBLD在SLE中的潛在功能，本研究建立了TMPD誘導(dǎo)的小鼠狼瘡模型（常用的小鼠狼瘡模型之一）。對(duì)6周齡雌性Pbld敲除小鼠和WT小鼠進(jìn)行TMPD注射，并監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展。

與SLE的全身性炎癥特征（累及多個(gè)器官）一致，TMPD處理的WT小鼠較Pbld缺陷小鼠出現(xiàn)更嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為脾臟和腎臟腫大及器官重量增加。狼瘡性腎炎是SLE的關(guān)鍵病理特征，以腎小球免疫復(fù)合物沉積及尿素氮和肌酐升高為特征。TMPD處理后，對(duì)照組小鼠的肌酐和尿素氮水平顯著高于Pbld缺陷小鼠。腎臟組織的H&E染色顯示，TMPD處理的WT小鼠較Pbld缺陷小鼠出現(xiàn)更嚴(yán)重的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。此外，對(duì)TMPD處理的WT小鼠和Pbld缺陷小鼠BMDMs的TCGA數(shù)據(jù)集進(jìn)行RNA測(cè)序（RNA-seq）分析，結(jié)果顯示PBLD表達(dá)與SLE相關(guān)通路（尤其是免疫系統(tǒng)過(guò)程相關(guān)通路）顯著相關(guān)。一致地，RNA-seq數(shù)據(jù)顯示，TMPD處理后，WT小鼠的Tmem173 mRNA表達(dá)較Pbld缺陷小鼠升高，提示TMPD誘導(dǎo)的狼瘡小鼠模型中，PBLD缺陷可減輕自身免疫表型。

為探究TMPD誘導(dǎo)的SLE小鼠中I型IFN通路的激活情況，本研究對(duì)PMs和BMDMs進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示與WT對(duì)照組相比，Pbld缺陷小鼠的PMs和BMDMs中TMPD誘導(dǎo)的Ifna、Ifnb、Isg15、Ifitm3、Mx1和Isg20表達(dá)受損。一致地，TMPD處理后，WT小鼠腎臟中這些 mRNA的表達(dá)較Pbld缺陷小鼠升高，與PBLD在調(diào)控這些基因表達(dá)中的正向作用一致。值得注意的是，WT組腎臟中的STING表達(dá)顯著高于Pbld缺陷對(duì)照組。此外，與礦物油處理對(duì)照組相比，TMPD處理的WT小鼠腎臟中STING的泛素化降低。鑒于PBLD表達(dá)受TFEB和MARCH2調(diào)控，本研究檢測(cè)了它們的表達(dá)，結(jié)果顯示TMPD處理可上調(diào)Tfeb并下調(diào)March2，提示TFEB和MARCH2的失調(diào)可能在SLE中調(diào)控PBLD表達(dá)。綜上，這些結(jié)果表明Pbld缺陷可減輕TMPD誘導(dǎo)的狼瘡模型中的自身免疫表型和免疫應(yīng)答。

研究結(jié)果八：SLE患者中PBLD表達(dá)上調(diào)且與疾病進(jìn)展呈正相關(guān)

鑒于PBLD在TMPD誘導(dǎo)的狼瘡小鼠模型中調(diào)控STING介導(dǎo)的I型IFN應(yīng)答的重要作用，本研究探究了其在SLE患者中的表達(dá)模式。利用來(lái)自公共基因表達(dá)綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（GEO）的四個(gè)獨(dú)立隊(duì)列（GSE121239、GSE112087、GSE72509、GSE49454）對(duì)PBLD表達(dá)進(jìn)行整合分析，結(jié)果顯示與健康對(duì)照組相比，SLE患者的PBLD mRNA顯著上調(diào)。值得注意的是，在SLE患者中，PBLD表達(dá)與IFN表達(dá)呈正相關(guān)。此外，這些患者中PBLD表達(dá)水平與I型IFN通路激活呈正相關(guān)。隨后，本研究利用疾病活動(dòng)指數(shù)（SLEDAI）重新分析了兩個(gè)公共數(shù)據(jù)集（GSE49454和GSE121239），結(jié)果顯示PBLD mRNA水平與SLE疾病活動(dòng)指數(shù)呈正相關(guān)，表明PBLD表達(dá)與SLE的疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。

為進(jìn)一步探究SLE患者中TFEB是否調(diào)控PBLD表達(dá)，本研究利用兩個(gè)公共數(shù)據(jù)集（GSE21239和GSE72509）進(jìn)行整合分析，結(jié)果顯示SLE患者的TFEB mRNA水平顯著高于健康供體。一致地，SLE患者的MARCH2 mRNA水平顯著低于健康供體，支持TFEB和MARCH2失調(diào)導(dǎo)致SLE中PBLD上調(diào)的假設(shè)。值得注意的是，與健康對(duì)照組相比，SLE患者的臨床血液樣本中PBLD、IFNA、IFNB和ISGs（ISG15、CXCL10、CCL5、IFIT1、IFIT2、STING、TFEB）的mRNA水平顯著上調(diào)，而MARCH2表達(dá)下調(diào)。綜上，這些結(jié)果表明PBLD表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)STING介導(dǎo)的通路，進(jìn)而加劇SLE患者中I型IFN的異常激活。

綜上所述，本研究圍繞含吩嗪生物合成樣結(jié)構(gòu)域蛋白PBLD展開(kāi)，揭示其在STING介導(dǎo)的免疫調(diào)控中的關(guān)鍵作用：PBLD 通過(guò)抑制CCDC50介導(dǎo)的 STING 選擇性自噬降解，正向調(diào)控 STING 依賴(lài)性抗病毒固有免疫應(yīng)答，而病毒感染會(huì)通過(guò)降低轉(zhuǎn)錄因子TFEB活性抑制 PBLD 轉(zhuǎn)錄、增強(qiáng)MARCH2介導(dǎo)的泛素 - 蛋白酶體途徑促進(jìn) PBLD 降解，形成負(fù)反饋環(huán)路助力病毒免疫逃逸，且 Pbld 缺陷小鼠對(duì) HAdV-4感染易感性顯著增加；同時(shí)，在 TMPD誘導(dǎo)的狼瘡小鼠模型中，Pbld 缺陷可降低 STING 表達(dá)并減輕自身免疫表型，臨床研究亦發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者 PBLD 表達(dá)升高且與 STING 介導(dǎo)的 I 型干擾素信號(hào)正相關(guān)。綜上，PBLD 在 STING 介導(dǎo)的抗皰疹病毒固有免疫及自身免疫中發(fā)揮雙重作用，為抗病毒感染與自身免疫性疾病的治療提供了潛在靶點(diǎn)。

文章來(lái)源： https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/41204829/