病毒病防控專(zhuān)家曾令兵：魚(yú)類(lèi)病毒病防控技術(shù)和藥物研制有了新進(jìn)展

淡水養(yǎng)殖業(yè)為保障國(guó)民蛋白質(zhì)來(lái)源、食物供給以及漁業(yè)增效、漁民增收發(fā)揮了不可替代的作用。然而，隨著我國(guó)淡水魚(yú)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，養(yǎng)殖模式不斷增多，規(guī)模不斷增大，集約化程度不斷提高，養(yǎng)殖病害問(wèn)題日趨突出，成為制約水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展的瓶頸因素之一。在淡水魚(yú)類(lèi)病害中，尤以病毒性疾病危害最為嚴(yán)重，不僅流行范圍廣，傳播速度快，死亡率高，而且防控手段有限，給養(yǎng)殖業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失。為此，筆者就病毒病防控、診斷方法及藥物研制進(jìn)展情況專(zhuān)訪了大宗淡水魚(yú)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系病毒病防控崗位專(zhuān)家曾令兵研究員。

問(wèn)：大宗淡水魚(yú)主要病毒性疾病的種類(lèi)有哪些？危害情況如何？

答：目前，在我國(guó)養(yǎng)殖大宗淡水魚(yú)中造成嚴(yán)重危害的病毒性疾病主要有四種，分別是草魚(yú)出血病、鯉春病毒血癥、錦鯉皰疹病毒病、鯽造血器官壞死癥。

1.草魚(yú)出血病

草魚(yú)出血病是20世紀(jì)60年代末期我國(guó)發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)魚(yú)類(lèi)病毒性疾病，其病原為草魚(yú)呼腸孤病毒(GCRV)。草魚(yú)出血病流行范圍廣，在我國(guó)大部分省份均有草魚(yú)出血病發(fā)生，其傳播速度快，流行季節(jié)長(zhǎng)，死亡率高達(dá)70%～80%，主要危害一齡草魚(yú)和二齡草魚(yú)魚(yú)種。近年的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，大規(guī)格草魚(yú)魚(yú)種以及養(yǎng)殖草魚(yú)成魚(yú)亦有草魚(yú)出血病發(fā)生。患病草魚(yú)以體表出血、肌肉出血、腸道充血為主要癥狀。病原學(xué)研究表明，迄今在我國(guó)養(yǎng)殖草魚(yú)中已發(fā)現(xiàn)三種基因型草魚(yú)呼腸孤病毒，主要流行株以草魚(yú)呼腸孤病毒基因型II型為主。

2.鯉春病毒血癥

鯉春病毒血癥是一種急性出血和流行性敗血癥，主要感染鯉魚(yú)及其變種，是養(yǎng)殖鯉魚(yú)最為嚴(yán)重的病毒性疾病之一，其病原為鯉春病毒血癥病毒(SVCV)。鯉春病毒血癥一般在春季水溫8～20℃暴發(fā)，水溫13～15℃時(shí)是流行高峰，死亡率可達(dá)70%。我國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《一、二、三類(lèi)動(dòng)物疫病病種名錄》中規(guī)定，將SVCV列為一類(lèi)疫病。

3.錦鯉皰疹病毒病

錦鯉皰疹病毒病是一種嚴(yán)重感染養(yǎng)殖鯉魚(yú)、錦鯉和雜交鯉的傳染性病毒病，其病原為錦鯉皰疹病毒(KHV)，又稱(chēng)鯉皰疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 2，CyHV-3)。錦鯉皰疹病毒病的發(fā)病水溫為16～30℃，患病鯉魚(yú)呈現(xiàn)暴發(fā)性死亡，感染種群患病率100%，死亡率70%～80%，有時(shí)可高達(dá)90%～100%，是近年來(lái)鯉魚(yú)和錦鯉養(yǎng)殖中最為嚴(yán)重的一種疾病。潛伏感染、水媒傳播是錦鯉皰疹病毒感染養(yǎng)殖鯉魚(yú)的重要特征，也是病原傳播的主要途徑。

4.鯽造血器官壞死癥

鯽造血器官壞死癥是近年來(lái)我國(guó)養(yǎng)殖鯽魚(yú)中暴發(fā)的一種嚴(yán)重的病毒性疾病，其病原為鯉皰疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2，CyHV-2)。鯉皰疹病毒II型主要感染觀賞魚(yú)金魚(yú)、養(yǎng)殖鯽魚(yú)及其變種，其流行范圍廣，傳播速度快，死亡率高，危害嚴(yán)重。異育銀鯽魚(yú)苗、魚(yú)種以及成魚(yú)對(duì)鯉皰疹病毒Ⅱ型敏感，死亡率高達(dá)90%以上。患病鯽魚(yú)以鰓絲充血、出血、胸腹鰭基部充血為典型特征。近年的CyHV-2監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，鯽造血器官壞死癥流行范圍存在不斷擴(kuò)大的趨勢(shì)，鯽魚(yú)繁育苗種場(chǎng)CyHV-2檢測(cè)陽(yáng)性樣本數(shù)量有所增加，暗示苗種帶毒以及病毒的潛伏感染特性是該疾病傳播的主要風(fēng)險(xiǎn)。

問(wèn)：魚(yú)類(lèi)病毒病發(fā)病原因與流行規(guī)律有哪些？

答：魚(yú)類(lèi)病毒病發(fā)病原因與流行規(guī)律主要有以下方面：

1.發(fā)病原因

從大的方面分析，魚(yú)類(lèi)病毒病的發(fā)病原因有內(nèi)在因素和外在因素兩個(gè)方面。在內(nèi)在因素方面，苗種質(zhì)量退化、抗病力下降以及苗種攜帶病毒病原與否，是疫病發(fā)生的重要內(nèi)在原因。在外在因素方面，包括病原、環(huán)境以及養(yǎng)殖操作三個(gè)方面。一是水產(chǎn)養(yǎng)殖因?yàn)榄h(huán)境的特殊性，病原生物絕大多數(shù)無(wú)處不在，是疫病發(fā)生的重要外在原因之一；二是養(yǎng)殖水環(huán)境惡化以及氣溫水溫等環(huán)境因素的變化，給養(yǎng)殖動(dòng)物造成巨大環(huán)境壓力，導(dǎo)致養(yǎng)殖動(dòng)物抵抗力下降，給病原生物提供感染機(jī)會(huì)，導(dǎo)致感染發(fā)生與疾病暴發(fā)；三是人為因素導(dǎo)致疾病發(fā)生，養(yǎng)殖過(guò)程中所有的養(yǎng)殖操作與健康管理措施如果缺乏科學(xué)性、合理性，不僅可以導(dǎo)致疾病發(fā)生，而且在疫病控制中因措施不當(dāng)而導(dǎo)致疾病嚴(yán)重化。總之，大宗淡水魚(yú)病毒病的發(fā)生與宿主抗病力特性、病原生物感染致病特性、養(yǎng)殖環(huán)境變化情況以及養(yǎng)殖操作科學(xué)性、合理性等密切相關(guān)。

2.流行規(guī)律

池塘養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)的病毒病主要在春、夏、秋等季節(jié)流行。鯉春病毒血癥病主要發(fā)生在春季，水溫8～20℃流行，水溫在13～15℃時(shí)為流行高峰，當(dāng)水溫超過(guò)22℃就不再發(fā)病。鯉春病毒血癥病毒可感染各種規(guī)格的鯉魚(yú)，包括鯉魚(yú)魚(yú)苗、魚(yú)種和成魚(yú)。草魚(yú)出血病每年有兩個(gè)流行高峰期，第一個(gè)高峰期主要集中在5－6月份，水溫22～30℃時(shí)流行，水溫25～28℃為流行高峰，主要危害二齡草魚(yú)魚(yú)種；第二個(gè)流行高峰期在每年9－10月，主要危害當(dāng)年草魚(yú)魚(yú)種。近年的流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，大規(guī)格草魚(yú)魚(yú)種以及草魚(yú)成魚(yú)也時(shí)有草魚(yú)出血病發(fā)生。錦鯉皰疹病毒病流行時(shí)間長(zhǎng)，發(fā)病水溫范圍廣，10～33℃水溫均可發(fā)生，尤以22～28℃最為嚴(yán)重。錦鯉皰疹病毒病主要危害鯉魚(yú)魚(yú)種與成魚(yú)，在我國(guó)北方地區(qū)與中部地區(qū)發(fā)病嚴(yán)重，尤其是在鯉魚(yú)養(yǎng)殖后期，養(yǎng)殖池塘負(fù)荷增大，水質(zhì)變化大，水體溫度變化大，極易導(dǎo)致魚(yú)體應(yīng)激而免疫力下降，促進(jìn)魚(yú)體內(nèi)攜帶或潛伏感染的病毒增殖而導(dǎo)致疾病暴發(fā)，死亡速度快，損失嚴(yán)重。鯉皰疹病毒II型感染養(yǎng)殖鯽魚(yú)引起的鯽造血器官壞死癥是近年我們鯽魚(yú)主要養(yǎng)殖區(qū)域發(fā)生的一種傳染性疾病，其流行范圍逐漸擴(kuò)大，傳播速度快，死亡率高。鯽造血器官壞死癥的流行水溫范圍為16～30℃，發(fā)病高峰期在春、秋兩季，水溫22～25℃。近年的流行病學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，鯉皰疹病毒II型也具有潛伏感染特性，部分鯽魚(yú)苗種場(chǎng)親魚(yú)、魚(yú)卵、魚(yú)苗攜帶病毒的情況較為普遍，進(jìn)一步加劇了該病毒通過(guò)苗種途徑的快速傳播，其流行范圍有進(jìn)一步擴(kuò)大趨勢(shì)。

問(wèn)：如何鑒別診斷魚(yú)類(lèi)病毒病？

答：鑒別診斷魚(yú)類(lèi)病毒病的方法為：

1.疾病癥狀

鑒于病毒病原與宿主之間的密切關(guān)系，疾病癥狀往往是判斷疾病種類(lèi)最為直接的指標(biāo)。依據(jù)疾病的癥狀，可以在第一時(shí)間內(nèi)較為準(zhǔn)確地進(jìn)行魚(yú)類(lèi)病毒病的鑒別診斷。魚(yú)類(lèi)主要病毒病的癥狀表現(xiàn)如下：

草魚(yú)出血病：患病草魚(yú)體色發(fā)黑，鰓蓋、下頜和鰭條基部充血。解剖可見(jiàn)肌肉、腸道充血，肝、脾、腎充血或失血。根據(jù)臨床癥狀可分為“紅鰭紅鰓蓋”“紅肌肉型”“腸炎型”三種類(lèi)型。

鯉春病毒血癥：病魚(yú)體色變暗，眼突出，鰓發(fā)白，體表、鰭條基部和泄殖孔出血，腹脹或者水腫，泄殖孔突出，并拖有黏稠的糞。

錦鯉皰疹病毒病：患病魚(yú)體表發(fā)白或變紅，體表觸感粗糙，失去部分或全部表皮，體表和鰓黏液過(guò)度分泌，鰓發(fā)白。有些病魚(yú)眼球內(nèi)陷，體表和鰭條基部出血，鰭條壞死。

鯽魚(yú)造血器官壞死癥：患病鯽體色發(fā)黑，體表以廣泛性充血或出血為主要癥狀，尤其以鰓蓋、下頜、前胸和腹部最為嚴(yán)重。患病魚(yú)鰓絲腫脹，瀕死魚(yú)鰓血管易破裂而出血。病魚(yú)解剖后可見(jiàn)淡黃色或者紅色腹水，肝、脾、腎等器官腫大、充血，鰾壁出現(xiàn)點(diǎn)狀或斑塊狀充血。

2.實(shí)驗(yàn)室診斷

魚(yú)類(lèi)病毒病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)主要應(yīng)用于疾病的確診，包括細(xì)胞培養(yǎng)、免疫診斷、分子診斷技術(shù)等，其中細(xì)胞培養(yǎng)與分子診斷應(yīng)用最為普遍。

細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒：通過(guò)收集患病魚(yú)組織，勻漿后超微過(guò)濾，感染相應(yīng)敏感性細(xì)胞系，適當(dāng)溫度培養(yǎng)后，感染細(xì)胞如出現(xiàn)典型細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，則可診斷為相應(yīng)的病毒。

利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)：使用病毒特異性引物，以病毒基因組RNA或DNA作為模板進(jìn)行RT-PCR或PCR檢測(cè)，如果擴(kuò)增出目的條帶，則說(shuō)明患病魚(yú)由病毒感染所致。

問(wèn)：病毒病的防治措施有哪些？大宗淡水魚(yú)體系病毒病防控崗位在病毒病防控上做了哪些工作？

答：魚(yú)類(lèi)病毒性疾病的防治是一個(gè)比較復(fù)雜的系統(tǒng)工程，養(yǎng)殖過(guò)程中的各環(huán)節(jié)都對(duì)疾病的發(fā)生有顯著影響。一般而言，投放不攜帶病毒的優(yōu)質(zhì)健康苗種、池塘清塘消毒殺滅病原體、水質(zhì)調(diào)控與科學(xué)投喂、適當(dāng)?shù)乃幬锓乐闻c免疫預(yù)防，能較為有效地控制魚(yú)類(lèi)病毒性疾病的發(fā)生與流行。具體而言，在投放苗種方面，要加強(qiáng)苗種產(chǎn)地檢驗(yàn)檢疫，確保投放的魚(yú)苗魚(yú)種不攜帶致病性病毒病原，避免將病毒病原通過(guò)苗種引進(jìn)途徑而輸入養(yǎng)殖場(chǎng)點(diǎn)，在投放魚(yú)種前，對(duì)魚(yú)體進(jìn)行消毒處理，也是比較有效的控制病原輸入的方法。在清塘消毒方面，冬季養(yǎng)殖間歇期間，要采用陽(yáng)光曝曬、藥物清塘等措施，盡可能殺滅淤泥或水體中的病毒病原，不僅清除傳染源，而且改善池塘底質(zhì)環(huán)境。在養(yǎng)殖過(guò)程中，控制水環(huán)境穩(wěn)定，避免池塘水體溫度劇烈變化，投喂優(yōu)質(zhì)飼料，切忌高溫期間過(guò)度投喂，可有效防止魚(yú)體因環(huán)境變化產(chǎn)生的應(yīng)激或過(guò)度營(yíng)養(yǎng)而導(dǎo)致免疫力、抵抗力下降，給病毒病原提供感染或快速增殖的機(jī)會(huì)，而導(dǎo)致疾病發(fā)生。在現(xiàn)階段的魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖過(guò)程中，藥物防治技術(shù)依舊是控制其疾病發(fā)生的主要方法，適當(dāng)?shù)乃幬镱A(yù)防與治療措施可以比較有效地控制魚(yú)類(lèi)病毒病的發(fā)生。但是，在使用藥物的過(guò)程中，要避免外用藥物對(duì)池塘養(yǎng)殖環(huán)境穩(wěn)定的破壞作用以及內(nèi)服藥物對(duì)魚(yú)體的毒性作用，盡可能選用對(duì)養(yǎng)殖水體中浮游動(dòng)、植物與益生微生物破壞作用小的藥物進(jìn)行水體消毒，選用毒副作用小的藥物進(jìn)行內(nèi)服，且避免長(zhǎng)時(shí)間高劑量使用藥物。內(nèi)服藥物要多以刺激魚(yú)體免疫力、改善魚(yú)體代謝環(huán)境與提高魚(yú)體健康水平的多糖、維生素以及天然植物藥物，促進(jìn)與提高魚(yú)體自身的免疫力與抗病力。其中天然植物抗病毒藥物，如大黃、板藍(lán)根、魚(yú)腥草、黃芪等，不僅具有明顯的抑制病毒復(fù)制增殖的能力，而且對(duì)于提高魚(yú)體免疫力有顯著作用。免疫預(yù)防技術(shù)代表了當(dāng)今國(guó)際上防控水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物病毒病的先進(jìn)生產(chǎn)力，其效果顯著，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)魚(yú)體與水環(huán)境無(wú)負(fù)面影響。目前我國(guó)已經(jīng)有草魚(yú)出血病疫苗批準(zhǔn)生產(chǎn)，可應(yīng)用于草魚(yú)出血病的免疫預(yù)防。

近些年來(lái)，在國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系“大宗淡水魚(yú)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系”病毒病防控崗位項(xiàng)目的支持下，本崗位團(tuán)隊(duì)成員針對(duì)我國(guó)大宗淡水魚(yú)病毒病開(kāi)展了流行病學(xué)調(diào)查，初步查明了其流行規(guī)律與發(fā)病原因；針對(duì)疾病的病原學(xué)、病理學(xué)與致病機(jī)理等，首次分離鑒定了草魚(yú)呼腸孤病毒基因型III型與鯉皰疹病毒II型病毒病，查明了其生物學(xué)特性、組織病理學(xué)特征與感染致病機(jī)理；在診斷方法方面，建立針對(duì)草魚(yú)呼腸孤病毒、鯉春病毒血癥病毒、錦鯉皰疹病毒、鯽造血器官壞死癥病毒的細(xì)胞培養(yǎng)病毒方法、電子顯微鏡鑒定方法以及分子生物學(xué)診斷方法10多種，其中，草魚(yú)呼腸孤病毒、鯉皰疹病毒II型LAMP可視化檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)在生產(chǎn)中試驗(yàn)應(yīng)用。在抗病毒藥物篩選方面，建立了體外篩選抗病毒藥物的細(xì)胞模型，篩選出抗病毒化學(xué)藥物與天然植物藥物10多種，研制出天然植物抗病毒復(fù)方制劑；在大宗淡水魚(yú)病毒病疫苗制備與免疫預(yù)防技術(shù)研究方面，建立了草魚(yú)出血病細(xì)胞疫苗和酵母載體表達(dá)亞單位疫苗、鯉春病毒血癥病DNA疫苗、錦鯉皰疹病毒病細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗、鯽造血器官壞死癥細(xì)胞滅活疫苗和酵母載體表達(dá)亞單位疫苗等的制備方法，建立了草魚(yú)腎臟組織細(xì)胞、鯽魚(yú)腦組織細(xì)胞以及病毒的規(guī)模化微載體培養(yǎng)技術(shù)，利用研制的疫苗，開(kāi)展了持續(xù)多年的免疫預(yù)防試驗(yàn)，在草魚(yú)出血病預(yù)防、鯽造血器官壞死癥預(yù)防等方面發(fā)揮了較大作用。

問(wèn)：大宗淡水魚(yú)類(lèi)病毒病防控今后的發(fā)展方向有哪些？

答：我國(guó)是世界性水產(chǎn)養(yǎng)殖大國(guó)，大宗淡水魚(yú)養(yǎng)殖占絕對(duì)支配地位。大宗淡水魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)不僅為國(guó)民提供了豐富的蛋白質(zhì)食物來(lái)源，而且為我國(guó)農(nóng)村社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展作出了重大貢獻(xiàn)。大宗淡水魚(yú)病毒性疾病問(wèn)題已經(jīng)成為我國(guó)大宗淡水魚(yú)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的瓶頸因素之一。因此，開(kāi)展大宗淡水魚(yú)病毒病防控技術(shù)研究不僅具有重要的理論意義，而且具有極大的推廣應(yīng)用前景。

參考國(guó)際上發(fā)達(dá)國(guó)家在水產(chǎn)養(yǎng)殖病毒病防治技術(shù)研究領(lǐng)域所取得的進(jìn)展，結(jié)合我國(guó)當(dāng)前大宗淡水魚(yú)病毒病的現(xiàn)狀，我們認(rèn)為，未來(lái)我國(guó)大宗淡水魚(yú)類(lèi)病毒病的發(fā)展動(dòng)向應(yīng)包括：

①在應(yīng)用基礎(chǔ)理論研究方面，應(yīng)注重疾病發(fā)生的內(nèi)在原因與流行規(guī)律研究，重點(diǎn)研究病毒病原與宿主相互作用機(jī)制、環(huán)境對(duì)宿主抵抗力的影響機(jī)制等問(wèn)題，徹底查明疾病發(fā)生的原因與病毒病原的致病機(jī)理。

②在關(guān)鍵技術(shù)研究方面，應(yīng)重點(diǎn)突破疫病的實(shí)用化診斷技術(shù)、水產(chǎn)藥物創(chuàng)制與安全使用技術(shù)、疫苗制備與免疫預(yù)防技術(shù)以及水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖管理與保健技術(shù)，切實(shí)落實(shí)疫病診斷技術(shù)在養(yǎng)殖現(xiàn)場(chǎng)的實(shí)用化問(wèn)題，努力緩解水產(chǎn)專(zhuān)用藥物缺乏，主要借鑒或借用人藥或獸藥的局面，重點(diǎn)突破水產(chǎn)疫苗規(guī)模化制備與產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用的關(guān)鍵技術(shù)，建立系統(tǒng)的水產(chǎn)養(yǎng)殖水環(huán)境調(diào)控、科學(xué)投喂與健康管理保健技術(shù)體系，預(yù)防與控制疾病的發(fā)生。

③在產(chǎn)業(yè)化方面，重點(diǎn)推動(dòng)大宗淡水魚(yú)病毒病實(shí)用化診斷技術(shù)產(chǎn)業(yè)化、水產(chǎn)疫苗商品化進(jìn)程；加強(qiáng)大宗淡水魚(yú)免疫增強(qiáng)劑、代謝改良劑、水環(huán)境調(diào)控微生態(tài)制劑的生產(chǎn)應(yīng)用；積極推動(dòng)無(wú)特定疫病苗種場(chǎng)、良種場(chǎng)建設(shè)，加強(qiáng)無(wú)特定疫病苗種、預(yù)免疫苗種的生產(chǎn)與推廣應(yīng)用工作，構(gòu)建基于生物安保與健康管理的從源頭抓起的大宗淡水魚(yú)病毒病防控體系。

作者：中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所，國(guó)家大宗淡水魚(yú)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系病毒病防控崗位 劉文枝 曾令兵

來(lái)源：科學(xué)養(yǎng)魚(yú)