專業分享|無菌工藝驗證常見問題（環境監測、氣流測試等）解讀

無菌工藝驗證是確保無菌生產工藝質量的關鍵環節，其實踐與關鍵點涉及多個方面，以下是對無菌工藝驗證涉及范圍及關鍵點的詳細剖析：

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無菌工藝驗證涉及范圍

無菌工藝驗證的范圍廣泛，包括人員、物料、設備、公用系統、環境等多個方面。驗證過程應涵蓋從無菌工藝的第一步開始，經除菌過濾或其他方法獲取無菌藥液，直至無菌產品完全密封結束的全過程。

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無菌工藝驗證基本原則

以GMP為準則:以藥品GMP法規要求為準則，不能通過模擬試驗來證實不規范操作的合理性。(最差條件)

基于風險評估:過程實施風險評估，識別生產過程風險點，鑒定在無菌工藝中的潛在弱點

關注高風險區域:特別關注“開放”操作、人工干預等高風險過程。

適用多種工藝:如生產線有多種無菌生產工藝，應評價模擬試驗方案對各無菌工藝過程的適用性

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環境監測措施

監測周期選擇：在模擬灌裝周期選擇上，優選無菌生產末期或滅菌最長間隔時為宜，以更好地評估生產過程中的無菌保證水平。

監測內容：環境監測包括無活性粒子和活性粒子兩部分。可使用主動采樣或被動采樣的方法進行空氣采樣，表面采樣最好在無菌操作結束后進行。另外，還應該對操作人員進行監測，確保他們的操作不會引入污染。

取樣點設置：取樣點的數量可以較日常監測適當增加，以確保取樣的代表性。同時，取樣過程要遵循相關操作規程，避免對產品質量造成影響。

微生物與懸浮粒子監測：在培養灌裝過程中，微生物監測（空氣、表面、人員）和懸浮粒子監測應按照各自的操作規程有效進行。這些監測結果可作為制定環境控制警戒限與糾偏限的依據。

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無菌工藝驗證的關鍵點

培養基的選擇：培養基應具備低選擇性、澄明、中等濃度和可過濾性，能支持大范圍的微生物生長。常用的培養基有TSA胰酪大豆胨瓊脂培養基、SDA沙氏葡萄糖瓊脂培養基、FLM硫乙醇酸鹽流體培養基等。

模擬灌裝：模擬灌裝過程應盡可能模擬實際生產的最大批量，并涵蓋生產過程中的各種干預和最差條件。灌裝結束后，系統中剩余培養基也應進行取樣培養，以備后期可能出現的染菌調研使用。

設備驗證：設備驗證是無菌工藝驗證的重要組成部分。應確保設備在無菌生產過程中的穩定性和可靠性，包括設備的清潔、消毒、滅菌以及無菌對接等方面的驗證。

人員驗證：人員驗證主要關注操作人員的無菌操作技能和無菌意識。應通過培訓和考核等方式，確保操作人員能夠熟練掌握無菌操作規程，并在實際操作中嚴格執行。

風險評估：無菌工藝驗證過程中應進行全面的風險評估，識別并評估生產過程中可能存在的污染風險點。通過風險評估，可以確定模擬驗證工藝與生產工藝之間的一致性或模擬工藝驗證的代表性，并采取相應的措施來降低污染風險。

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無菌工藝的再驗證

法規性和定期性的再驗證

計量器具(每年一次)

培養基灌裝(每年兩次)

高效過濾器泄漏試驗(每年兩次)

關鍵滅菌設備及滅菌程序(滅菌釜，熱隧道，凍干機，儲液罐)(每年一次)

人員(每年一次)

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變更引起的再驗證

變更應評估對產品質量可能的影響

原料，包材

工藝參數或路線

設備改變或重大維修

處方改變，批量改變

偏差、質量事故等

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無菌工藝驗證常見問題及解決方案

無效的無菌工藝驗證：可能由于培養基促生長實驗失敗、無菌灌裝區域的物理環境失敗或按照正常程序進行操作失敗等原因導致。此時，需要重新進行無菌工藝驗證，并對相關過程進行記錄和保存。

環境監控微生物鑒別策略：在無菌生產區域的環境監測中分離的微生物應進行常規鑒定，以提供足夠有意義的數據來評估潔凈室的微生物群。

模擬灌裝與風險評估的關聯：模擬灌裝過程中應充分考慮風險評估的結果，確保模擬驗證工藝能夠代表實際生產工藝，并涵蓋所有對產品的無菌特性有影響的關鍵操作及生產中可能出現的各種干預和最差條件。

在無菌工藝驗證中，PAO（過氧化氫）測試、風速測試、粒子測試及流型測試是關鍵的環境參數測試，它們對于確保無菌環境的穩定性和可靠性至關重要。以下是這些測試的具體要求：

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PAO（過氧化氫）測試

PAO測試通常用于驗證無菌設備的滅菌效果。過氧化氫是一種常用的滅菌劑，能夠殺滅包括細菌、病毒和芽孢在內的多種微生物。

測試目的：評估過氧化氫滅菌設備在特定條件下的滅菌效果。

測試方法：使用含有PAO的指示劑來模擬微生物污染，然后通過過氧化氫滅菌設備進行滅菌處理。處理結束后，檢查指示劑的顏色變化來判斷滅菌是否成功。

測試頻率：根據設備的使用頻率和滅菌要求來確定。通常，在設備首次使用前、大修后或懷疑設備性能時需要進行測試。

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風速測試

風速測試用于評估無菌區域內空氣的流動速度和方向，以確保空氣能夠有效地帶走污染物并保持無菌環境的穩定性。

測試目的：驗證無菌區域內空氣流動的速度和方向是否符合要求。

測試方法：使用風速計在無菌區域內的不同位置進行測量，記錄風速值并觀察空氣流動方向。

測試標準：根據ISO 14644等國際標準或相關法規要求，無菌區域的風速應滿足一定的要求。例如，ISO 5（A級）區域的風速通常要求不低于0.45m/s，且風速不均勻度不應大于0.25m/s。

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粒子測試

粒子測試用于評估無菌區域內空氣中的微粒數量，以判斷環境是否滿足無菌要求。

測試目的：監測無菌區域內空氣中的微粒數量，確保環境潔凈度符合要求。

測試方法：使用激光粒子計數器在無菌區域內的不同位置進行采樣，記錄微粒數量和大小分布。

測試標準：根據ISO 14644等國際標準或相關法規要求，無菌區域內的微粒數量應控制在一定范圍內。例如，ISO 5（A級）區域內直徑大于或等于0.5μm的微粒數量不得超過每立方米3520個。

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流型測試

流型測試用于評估無菌區域內空氣流動的模式和穩定性，以確保空氣能夠有效地帶走污染物并保持無菌環境的均勻性。

測試目的：驗證無菌區域內空氣流動的模式和穩定性是否符合要求。

測試方法：使用煙霧發生器或其他可視化工具將無菌區域內的氣流可視化，觀察并記錄氣流的流動模式和穩定性。

測試標準：氣流應呈現單向流動，且不應出現渦流、回流或停滯等異常現象。同時，氣流應均勻分布在整個無菌區域內。

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