研究終于證實(shí)！為何男性更易患帕金森？原來(lái)與這一因素有關(guān)

帕金森病（PD）是一種常見的神經(jīng)退行性疾病，主要影響60歲以上的老年人，表現(xiàn)為震顫、肌肉僵硬、運(yùn)動(dòng)遲緩和步態(tài)不穩(wěn)等癥狀。全球約有700萬(wàn)人患病，隨著人口老齡化的加劇，這一數(shù)字將顯著增加。隨著PD患者數(shù)量的增加，其對(duì)社會(huì)和醫(yī)療系統(tǒng)的負(fù)擔(dān)也在不斷加重，尤其是在長(zhǎng)期護(hù)理和治療方面。

帕金森病（PD）的患病率在男性中顯著高于女性，男性的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)大約是女性的1.5至2倍。這一性別差異在多個(gè)流行病學(xué)研究中得到了證實(shí)，并且在不同年齡段的患者中普遍存在。盡管已有研究探討了可能的因素，包括遺傳易感性、激素水平差異（如雄激素的神經(jīng)保護(hù)作用）以及生活方式因素（如吸煙等），但具體機(jī)制仍不完全明了。

最近，Journal of Clinical Investigation在線發(fā)表了一篇題為“PINK1 is a target of T cell responses in Parkinson’s disease”的研究論文，該研究設(shè)計(jì)了15-肽肽庫(kù)，覆蓋多種與PD病理相關(guān)的蛋白。研究使用熒光斑點(diǎn)檢測(cè)法，測(cè)量PD患者和年齡匹配的健康對(duì)照個(gè)體的外周血單個(gè)核細(xì)胞對(duì)這些蛋白的細(xì)胞因子產(chǎn)生情況。該方法確定了多個(gè)特異性表位及其HLA限制性，發(fā)現(xiàn)線粒體相關(guān)蛋白PINK1（調(diào)節(jié)線粒體穩(wěn)定性）是T細(xì)胞靶向的自身抗原。T細(xì)胞反應(yīng)主要出現(xiàn)在男性PD患者中，這可能是PD異質(zhì)性的重要因素。

篩選PD相關(guān)蛋白的自身抗原T細(xì)胞反應(yīng)

研究從 39 名帕金森病（PD）患者和 39 名健康對(duì)照（HC）個(gè)體的全血樣本中提取外周血單核細(xì)胞（PBMCs），評(píng)估了六種與 PD 相關(guān)的蛋白（PINK1、parkin、OGDH、GBA、SOD1、LRRK2）是否能成為 T 細(xì)胞識(shí)別靶點(diǎn)，篩選依據(jù)包括其遺傳關(guān)聯(lián)、在路易小體中的存在及臨床前模型中的作用（圖 1a）。

假設(shè) PD 患者對(duì)這些抗原的 T 細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)于 HC。PBMCs 體外刺激 14 天后，采用三色 Fluorospot 檢測(cè) IFNγ、IL-5 和 IL-10，以評(píng)估 Th1、Th2 和 Treg 反應(yīng)。

與對(duì)照組相比，PD患者的PINK1特異性T細(xì)胞反應(yīng)性更高（圖1b）。PD 患者對(duì) PINK1 的 T 細(xì)胞反應(yīng)頻率顯著高于 HC。其他神經(jīng)抗原（GBA、LRRK2、SOD1、OGDH、Parkin）的反應(yīng)亦增強(qiáng)，但未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。結(jié)果表明 PD 患者 PINK1 特異性 T 細(xì)胞反應(yīng)增強(qiáng)，其他神經(jīng)抗原反應(yīng)亦可能增加。

圖1. 篩選PD相關(guān)蛋白的自身抗原T細(xì)胞反應(yīng)

PD患者的T細(xì)胞反應(yīng)性

分析發(fā)現(xiàn)，LRRK2 反應(yīng)與年齡正相關(guān)，GBA 和 SOD1 反應(yīng)隨診斷時(shí)間增加而下降，SOD1 反應(yīng)與 LED 呈負(fù)相關(guān)。PINK1 反應(yīng)未顯示相關(guān)性。此前研究表明，α-syn 反應(yīng)在 PD 診斷初期較高，隨后減弱，GBA 和 SOD1 反應(yīng)呈現(xiàn)類似趨勢(shì)。結(jié)果表明，神經(jīng)抗原特異性 T 細(xì)胞反應(yīng)受年齡和診斷時(shí)間不同影響。

神經(jīng)抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)功能

PD 患者 PINK1 反應(yīng)增強(qiáng)主要由男性驅(qū)動(dòng)（男性 5.1 倍；女性 1.2 倍）(圖2a,b)。類似趨勢(shì)見于 LRRK2（男性 5.8 倍，女性 0.8 倍）和 parkin（男性 2.1 倍，女性 0.8 倍）。

PINK1+parkin 反應(yīng)在男性 PD 組增強(qiáng)，女性無(wú)顯著變化（圖2c）。IFNγ 仍占主導(dǎo)，女性 HC 和 PD 組 IFNγ 反應(yīng)顯著高于 IL-5（圖2d）。結(jié)果表明，PD 自身抗原的 T 細(xì)胞反應(yīng)存在性別差異，涉及抗原特異性和細(xì)胞因子表達(dá)模式。

圖2. 神經(jīng)抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)作為生理性別的功能

PINK1反應(yīng)性T細(xì)胞的表型特征

通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析 PINK1 肽段池刺激后的擴(kuò)增/產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞表型(圖3a)。在活細(xì)胞、單一 CD3+ 細(xì)胞的基礎(chǔ)上（圖 3b），發(fā)現(xiàn)主要的細(xì)胞類型是 CD4+ T 細(xì)胞，顯著高于 CD8+ T 細(xì)胞和非 CD3 細(xì)胞（圖3c）。這些結(jié)果表明，識(shí)別 PINK1 表位的主要細(xì)胞類型是 CD4+ T 細(xì)胞，符合其他 PD 神經(jīng)抗原的觀察。

圖3. PINK1反應(yīng)性T細(xì)胞的表型特征

單個(gè)PINK1表位的鑒定

作者刺激了 18 名 PD PINK1 響應(yīng)者（15 男性，3 女性）使用 PINK1 重疊肽池，并通過(guò) 10 個(gè)小的 PINK1 “mesopools”重新刺激（圖4a），識(shí)別出 34 個(gè)能引發(fā) T 細(xì)胞反應(yīng)的 PINK1 表（圖4b）。

每位 PD 患者平均識(shí)別 5.2 個(gè)表位（圖4c）。主要表位 aa216 LAIKMMWNISAGSSS 被 55.5% 的 PD 患者識(shí)別（圖4d）。共有 7 個(gè)表位在 3 名或以上的參與者中被識(shí)別。

圖4. PD中引發(fā)T細(xì)胞反應(yīng)的PINK1表位的鑒定

PINK1表位潛在HLA限制性基因的測(cè)定

上述結(jié)果表明，PINK1 肽池刺激后，CD4 T 細(xì)胞是主要擴(kuò)展的 T 細(xì)胞亞群。通過(guò) NetMHCIIpan EL 4.1 工具分析 18 個(gè)表位，發(fā)現(xiàn) 14 個(gè)表位具有至少一個(gè) HLA 限制。

對(duì)于其他 4 個(gè)表位，未發(fā)現(xiàn) HLA II 限制，但其 15-mer 肽能與 HLA I 類分子結(jié)合，表明 CD8 T 細(xì)胞也參與了反應(yīng)。總的來(lái)說(shuō)，多個(gè)表位表現(xiàn)出廣泛的 HLA 結(jié)合特性和多樣的 HLA 限制。

總結(jié)

總的來(lái)說(shuō)，該本研究確定了PINK1作為帕金森病（PD）中T細(xì)胞的常見自體抗原靶標(biāo)。通過(guò)分析，發(fā)現(xiàn)男性PD患者的PINK1特異性T細(xì)胞反應(yīng)更為明顯，并觀察到多種分泌細(xì)胞因子。PINK1蛋白的多個(gè)表位被多名患者識(shí)別，且其中一些表位的識(shí)別與特定的HLA等位基因相關(guān)。

PINK1在PD患者中作為自體抗原的識(shí)別，可能與其在路易小體中的存在以及被小膠質(zhì)細(xì)胞或其他CNS抗原呈遞細(xì)胞呈遞有關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)PINK1的磷酸化修飾可能是誘導(dǎo)T細(xì)胞反應(yīng)的關(guān)鍵因素。總的來(lái)說(shuō)，這些發(fā)現(xiàn)突出了免疫系統(tǒng)在PD中的重要性，強(qiáng)調(diào)了PINK1作為T細(xì)胞靶標(biāo)的潛力，并支持基于免疫的個(gè)性化治療方法的發(fā)展。

文章鏈接：10.1172/JCI180478

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