近日,西北農林科技大學園藝學院胡曉輝教授課題組在《Plant, Cell & Environment》期刊上發表題為“The SlMYC2‐SlNAC90‐SlNAC102 Module Mediates Low-Temperature Stress Responses in Tomato by Regulating Jasmonic Acid Biosynthesis”的研究成果。孟祥光博士為論文第一作者,胡曉輝教授為通訊作者。
研究團隊基于前期番茄低溫轉錄組數據,篩選到NAC家族成員SlNAC90——其表達受低溫(4℃)和JA顯著誘導。通過CRISPR-Cas9基因編輯和過表達技術構建SlNAC90轉基因株系,發現過表達SlNAC90的番茄在低溫處理后仍保持健康生長,而敲除株系出現嚴重萎蔫;生理指標顯示,過表達株系的相對電導率(REC)、丙二醛(MDA)含量顯著降低,過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性顯著升高,同時光合系統II最大光化學效率(Fv/Fm)更穩定,活性氧(ROS)積累量減少,證實SlNAC90是番茄低溫響應的正調控因子。
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圖1 SlNAC90過表達與敲除株系的低溫表型及生理指標差異
為解析SlNAC90的作用靶標,研究通過酵母單雜交(Y1H)、凝膠遷移率變動實驗(EMSA)、染色質免疫共沉淀-定量PCR(ChIP-qPCR)及雙熒光素酶報告實驗(Dual-Luc),證實SlNAC90可直接結合JA合成關鍵基因SlLOXC的啟動子“CACG”基序,激活其轉錄。SlLOXC作為13-脂氧合酶(13-LOX)家族成員,是JA合成的限速酶——過表達SlLOXC可使低溫下番茄葉片JA含量顯著提升,ROS清除能力顯著增強;而敲除SlLOXC則導致JA含量顯著下降,低溫敏感性顯著增加,明確了SlLOXC是SlNAC90調控JA合成的直接下游靶基因。
進一步研究發現,SlNAC90可與另一個NAC家族成員SlNAC102發生蛋白互作(通過Y2H、GST Pull-Down、雙分子熒光互補(BiFC)及熒光素酶互補成像(LCI)驗證)。盡管SlNAC102自身不能結合SlLOXC啟動子,但與SlNAC90互作后可顯著增強SlNAC90對SlLOXC的結合與轉錄激活能力——Dual-Luc實驗顯示,兩者共表達時SlLOXC的LUC/REN活性較SlNAC90單獨表達顯著提升,證實SlNAC102是SlNAC90的關鍵共激活因子。最后,研究團隊聚焦JA信號通路核心轉錄因子SlMYC2,發現其表達同樣受低溫和JA誘導,且可通過結合SlNAC90、SlNAC102啟動子的“G-box”基序(-CACGTG-),促進兩者轉錄。
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圖2 SlMYC2-SlNAC90-SlNAC102-SlLOXC模塊調控番茄低溫脅迫模式圖
論文鏈接:
https://doi.org/10.1111/pce.70268
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