江蘇
背景
心力衰竭以心肌肥厚、心肌間質纖維化、心腔重構以及心室順應性下降為主要特征，隨著人口老齡化及肥胖、久坐生活方式以及心臟代謝性疾病負擔的增加，其發病率仍在持續上升。然而，心臟病理發生的分子機制仍未得到充分闡明。
核孔蛋白作為核孔復合體的組成部分，參與核-質間物質運輸，并在細胞活動及基因轉錄調控中發揮必不可少的作用。此前的研究表明，核孔蛋白 Nup35在體外培養的心肌細胞中對于維持細胞內pH穩態發揮選擇性作用，但心臟Nup35在體內病理性心臟重構中的具體作用迄今尚未報道。
近日，復旦大學附屬中山醫院葛均波教授團隊最新研究首次揭示，Nup35的缺失會顯著加速心肌纖維化、肥厚與舒張功能障礙，而恢復Nup35或其下游關鍵因子Wif1的表達則能夠逆轉這些病理損傷，為探索心衰發生發展的全新分子通路提供了關鍵突破。該研究成果發表于心臟知名期刊Cardiovascular Research。
研究結果
1.病理性心臟重構過程中，心肌細胞核孔蛋白Nup35顯著下調
在篩查核孔蛋白在心衰過程中的表達變化時，研究團隊首先對Ang II 處理的小鼠心臟進行了RNA測序，結果顯示Nup35是下降最顯著的核孔蛋白（圖1A）；隨后通過RT-qPCR和免疫印跡進一步證實 Ang II能顯著降低心肌中Nup35的表達（圖1B、1C）。在TAC壓力負荷模型中，研究者同樣觀察到Nup35的 mRNA和蛋白水平均明顯減少（圖1D、1E），而免疫共染結果顯示Nup35主要定位于心肌細胞核孔區域，并在Ang II刺激后顯著下降（圖1F）。分析人類擴張型心肌病（DCM）公開數據庫進一步發現Nup35在患者心臟中也呈持續下調（圖1G、1H）。體外實驗中，新生大鼠心肌細胞在Ang II刺激下 Nup35表達隨時間呈依賴性下降（圖1I），并且使用AT1R拮抗劑纈沙坦能夠逆轉Ang II導致的Nup35下調（圖1J）。綜上，多種體內外證據一致表明，Nup35在病理性心臟重構早期即顯著下調，提示其可能參與心衰發生發展的關鍵機制。
圖1 心肌細胞核孔蛋白 Nup35 在心臟病理性重構過程中表達降低
2.成年心肌細胞中缺失Nup35會加重血管緊張素II和主動脈縮窄誘導的心肌纖維化及心臟功能障礙
研究團隊首先利用AAV9-cTnT-Cre 在 Nup35^flox/flox小鼠中實現心肌細胞特異性敲除（圖2A），并驗證Nup35的mRNA和蛋白水平均顯著下降（圖2B、2C）。在 Ang II 刺激條件下，盡管SBP同樣升高，但Nup35缺失并不影響血壓水平（圖2D）。然而超聲心動圖顯示，Ang II 可升高 E/e′，而Nup35缺失會進一步加重這一舒張功能障礙（圖2E、2F）。組織學檢查進一步證實Nup35缺失明顯加重Ang II 誘導的心肌纖維化（圖2G），并伴隨纖維化相關基因顯著上調（圖2H），且經qPCR與免疫染色得到驗證（圖2I、2J）。這些結果表明，成年心肌中缺失Nup35會顯著加重Ang II與TAC所致的心肌纖維化、舒張功能障礙和病理性心臟重構。
圖2 成年心肌細胞中敲除 Nup35會導致心肌纖維化與心臟功能障礙
3.心臟特異性過表達Nup35可緩解心肌纖維化并改善舒張功能障礙
為了驗證Nup35的補充是否能夠改善心衰進程，研究團隊首先通過AAV9-cTnT-Nup35在小鼠心臟中實現Nup35的有效過表達（圖3A），并觀察到其可顯著提升 Ang II和PBS條件下的Nup35蛋白表達（圖3B）及mRNA水平（圖3C）。功能分析顯示，Nup35過表達明顯改善了Ang II誘導的心臟舒張功能障礙（圖3D）；組織學檢查進一步證實其可顯著減輕心肌纖維化（圖3E–G），并降低心肌細胞死亡水平（圖3H）。這些結果表明，Nup35過表達能夠在Ang II誘導的心衰模型中發揮保護作用，改善心肌纖維化與心臟功能障礙。
圖3 Nup35 過表達可減輕 Ang II 誘導的病理性心臟重構
4.心肌細胞中過表達Wif1可逆轉由Nup35缺失介導的病理性心臟重構
為了驗證Nup35缺失所導致的心臟重構是否由Wif1成熟轉錄本減少引起，研究團隊使用AAV9-cTnT-Wif1在Nup35CKO與WT小鼠心肌細胞中過表達Wif1（圖6A），并通過qPCR與免疫印跡證實過表達效率（圖6B、6C）。Wif1的提升并不影響血壓水平，但顯著改善了WT小鼠的Ang II誘導型心臟功能障礙（圖6D）。在Nup35CKO小鼠中，未過表達Wif1的小鼠表現出進行性舒張功能惡化，而AAV9-cTnT-Wif1則使E/e′降低、心功能得到恢復（圖6D）。同時，Wif1過表達顯著減輕了兩組小鼠的心肌纖維化（圖6E、6F）并改善心肌肥厚（圖6G）。這些證據表明，心肌特異性過表達Wif1能有效抵消Nup35缺失帶來的病理性心臟重構，具有關鍵保護作用。
圖4 心肌細胞中過表達 Wif1 可逆轉由 Nup35 缺失介導的病理性心臟重構
結論
本研究系統揭示了Nup35–Wif1通路在調控心臟病理性重構中的關鍵作用。Nup35 在心肌細胞中受到壓力刺激后顯著下調，其缺失會加速纖維化、肥厚以及舒張功能障礙；而無論是上調Nup35還是補充其下游關鍵因子Wif1，都能有效逆轉心肌損傷，改善心功能。這些發現不僅填補了核孔蛋白在心衰機制研究中的空白，也為通過調控 mRNA 核輸出治療心衰提供了全新的干預靶點。
專家簡介
葛均波
復旦大學附屬中山醫院（點擊查看專家詳細簡歷）
潘磊
復旦大學附屬中山醫院（點擊查看專家詳細簡歷）
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