Journal of Hepatology丨解析參與HBV病毒感染調控的宿主因子

全球約有2.9億慢性乙肝感染者，其中中國仍是高流行地區。現有核苷（酸）類藥物雖能有效抑制病毒復制，但難以清除cccDNA，治愈率極低；干擾素療效有限且副作用明顯。HBV編碼基因有限，在其生命周期各階段嚴重依賴宿主細胞因子，因此全面揭示宿主調控網絡，是開發功能性治愈策略的關鍵突破口。

近日，武漢大學泰康醫學院（基礎醫學院）程曉明研究員在國際肝病領域期刊Journal of Hepatology在線發表題為

A genome-wide siRNA screen identifies previously unknown proviral and antiviral host factors in HBV infection

在本研究中，團隊利用HBV感染HepG2-NTCP細胞模型，結合高通量 AlphaLISA 檢測體系，構建了覆蓋21585個人類基因的全基因組siRNA篩選平臺。首輪高通量篩選結果經過嚴格統計校正分析后，結果顯示超過2000個宿主基因參與調控HBV感染周期。經過多輪驗證篩選，作者選擇對此前尚未報道或調控效果顯著的促病毒因子 NCOA5 、CHD4和抗病毒因子NRAS進行了深入的研究。通過多模型解析（包括siRNA敲低、過表達與CRISPR/Cas9敲除、PHH原代肝細胞感染、HBV多基因型復制子模型、以及cccDNA小鼠模型），驗證了它們對HBV生活周期（轉錄階段）的調控作用。機制上，NCOA5通過ERα-HNF4α軸促進HBV轉錄； CHD4 則通過改變cccDNA微染色體組蛋白修飾（如H3K27ac、H3K36me3）調控病毒基因組轉錄；而敲低NRAS通過上調HNF4A表達與誘導細胞周期G0/G1停滯促進病毒轉錄。研究團隊進一步發現在HBV相關肝癌組織中，NRAS表達普遍升高并伴隨HBV RNA下降，提示腫瘤微環境中的RAS活化可能是轉化后肝細胞中HBV復制受到抑制的原因。

本研究構建了基于HBV感染模型的全基因組功能篩選體系，系統揭示了HBV生命周期中廣泛且復雜的宿主依賴性網絡。雖然人原代肝細胞（PHH）是HBV體外感染模型的金標準，但由于PHH供體差異大，數量有限，不能滿足高通量篩選的需求。HBV在肝癌細胞系中的感染效率有限且感染水平不均一，制約了混合篩選策略的應用。使用siRNA陣列篩選，避免了CRISPR/Cas9敲除與細胞活性相關的宿主因子，阻礙對HBV宿主互作網絡的全面解析。未來研究將持續深入驗證解析其它參與調控HBV生活周期的宿主因子，進一步深化對HBV-宿主互作的理解，為開發針對宿主的新型抗乙肝治療策略奠定基礎。

來源 BioArtMED

編輯 老Q