中藥復方-民族藥理2區 | 上海中醫藥大學揭示脈絡寧抑制TGFβ/Smad介導的細胞外基質生成減輕肝纖維化

【寫在前面】：本期推薦的是由上海中醫藥大學等研究團隊合作近期發表于Journal of Ethnopharmacology(IF5.4）的一篇文章，揭示中藥脈絡寧通過抑制TGFβ/Smad介導的細胞外基質生成減輕肝纖維化。

【期刊簡介】

【題目及作者信息】

背景：在中國傳統醫學理論中，治療肝纖維化的主要原則包括清熱解毒、扶正補虛、活血化瘀。脈絡寧（MLN）是一種中藥復方制劑，由五味中草藥組成：金銀花、山銀花、玄參、石斛和牛膝。這些中藥具有協同增效的作用：金銀花、山銀花清熱解毒，石斛滋陰清熱，牛膝化瘀通絡，玄參清熱解毒、滋陰散結，基于其藥理活性，這些中藥被廣泛應用于中國抗肝纖維化的復方制劑中，其協同作用使MLN成為相關的治療選擇。

目的： 評價MLN對肝纖維化的治療作用，探索其潛在機制并發現其潛在的活性化合物。

方法：使用CCl4或高脂飲食（HFD）和CCl4的組合建立小鼠肝纖維化模型。評估血清生化參數和肝臟組織學觀察以評估MLN的抗纖維化功效。通過轉錄組學分析、RT-PCR和WB實驗探究并驗證關鍵的信號途徑。通過“配方分解”實驗，以確定有助于MLN抗纖維化作用的主要中藥，并進行分子對接和MST分析以發現活性化合物。

結果：MLN（13、40 g/kg）預防性或治療性給藥均能降低CCl4誘導的肝纖維化大鼠肝組織膠原沉積和羥脯氨酸含量，降低血清透明質酸（HA）和IV型膠原（Col IV）水平，同時抑制ECM合成相關基因的表達。轉錄組學分析和驗證實驗表明，MLN的抗纖維化作用與調節ECM生成、血管生成和炎癥反應有關，主要涉及HIF-1α、TGFβ和NFκB信號通路。拆方實驗結果表明，玄參是MLN抗肝纖維化作用的主要活性藥物，但去除玄參后MLN的抗肝纖維化作用明顯減弱。此外，在HFD+CCl4模型中，MLN（13、40 g/kg）還可減少肝膠原沉積和血清HA和Col IV水平，并主要通過抑制TGFβ-Smad 2/3途徑抑制ECM產生。從玄參中提取的5個化合物安格洛苷C（AC）、哈巴俄苷（HPG）、桃葉珊瑚苷（Au）、獐牙菜苷（SWE）和京尼平苷酸（GPA）均能抑制TGFβ誘導的肝星狀細胞（HSC）活化，AC和HPG與TGFβRⅡ或TGFβRⅠ的結合力較弱，AC能降低TGFβRⅠ和TGFβRⅡ的mRNA的表達，而HPG和GPA在體外可降低TGFβRⅠ的mRNA的表達，MLN在體內可降低肝組織TGFβRⅠ和TGFβRⅡ的mRNA的表達。

結論：MLN主要通過抑制TGFβ信號通路抑制ECM的產生來減輕肝纖維化，玄參是MLN抗肝纖維化作用的主要成分，AC、HPG和GPA是MLN抗肝纖維化的關鍵活性成分。

圖文摘要

【前言】

肝纖維 化是各種慢性肝病創傷愈合反應導致的細胞外基質（ECM）在肝臟內過度積聚的病理過程。在早期，肝纖維化在去除潛在的損傷刺激后是可逆的，但如果不及時治療，可能進一步發展為不可逆的嚴重肝硬化。在全球范圍內，晚期肝纖維化的患病率估計為3.3%，肝硬化為1.3%。每年大約1%-4%的肝硬化患者發展為肝細胞癌（HCC），其具有大約20%的5年存活率。因此，肝纖維化的有效管理具有高度的臨床重要性。

目前的治療策略集中在抑制ECM產生和促進纖維化消退以防止肝纖維化進展為肝硬化。肝纖維化的發病機制是復雜的，涉及多個相互關聯的生物學過程，如ECM的產生，血管生成和炎癥。其中，TGFβ與其受體結合形成復合物，誘導Smad2/3磷酸化和核轉位，進而促進ECM合成相關基因的表達。膠原沉積典型地起始于門靜脈區，并逐漸延伸至整個肝臟，形成短纖維間隔。隨著纖維化的進展，這些短纖維間隔連接相鄰的門 靜脈區，最終形成橋接纖維間隔。多個橋接間隔的相互連接隔離了單個肝小葉，損害從血液到肝細胞的氧氣和營養物質的輸送，并在纖維形成期間引發缺氧反應。HIF-1α信號通路，上調血管生成相關基因的表達。然而，這種病理性血管生成通常是功能障礙，不能恢復足夠的氧和營養供應，以糾正肝臟缺氧，但進一步破壞了正常的組織結構和加劇肝纖維化。此外，缺氧還與炎癥密切相關，NF-κB信號通路激活及其下游促炎性細胞因子的釋放，從而通過增強肝星狀細胞（HSC）的活化進一步加重肝纖維化并引起組織損傷。因此，以ECM產生、血管生成和炎癥為靶點的治療策略對肝纖維化的治療具有很大的前景。

鑒于ECM沉積是肝纖維化的起始因素，通過抑制TGFβ-Smad2/3信號通路來減少ECM的產生已成為治療肝纖維化的主要方法。例如，細胞外基質蛋白1（ECM 1），一種膠原蛋白中的糖蛋白，通過抑制血小板反應蛋白或基質金屬蛋白酶介導的潛在TGFβ的蛋白水解來維持TGFβ的未成熟形式，因此可作為TGFβ抑制劑減輕肝纖維化。類似地，轉錄中間因子1γ（TIF1γ），一種轉錄輔阻遏物，通過直接結合Smad2/3來抑制TGFβ誘導的膠原合成相關基因的表達，從而防止纖維化。開發有效的肝纖維化治療藥物是臨床上的迫切需求。這些發現證實了靶向TGFβ-Smad2/3信號通路是開發抗纖維化藥物的 可行策略。

在傳統中醫理論的背景下，肝纖維化被分類為諸如腹部腫塊和肝郁的綜合征，其發病機理歸結為氣陰兩虛，瘀血阻絡，治療肝纖維化的基本原則是清熱解毒、補虛活血、化瘀。脈絡寧是由五味中藥組成的中藥復方，金銀花、山銀花、玄參、石斛和牛膝，具有清熱養陰、活血化瘀的功效，在國內廣泛用于治療陰虛內熱型和血栓閉塞性脈管炎、動脈閉塞性脈管炎、靜脈血栓栓塞癥等血管瘀阻型。基于中醫理論，MLN是治療肝纖維化的潛在候選藥物，本研究旨在評價MLN抗肝纖維化的作用，闡明其作用機制，并篩選其潛在活性成分。

【結果部分】

1. 預防性和治療性給予MLN均減輕CCl4誘導的小鼠肝纖維化。

2.使用轉錄組學分析MLN發揮療效的重要信號通路。

3.MLN抑制TGFβ-Smad 2/3、NF-κB和HIF-1α信號通路。

4.玄參是MLN抗肝纖維化作用的主要成分。

5.MLN減輕HFD聯合CCl4誘導的小鼠肝纖維化。

6.MLN抑制HFD聯合CCl4誘導的小鼠TGFβ-Smad2/3信號通路。

7.玄參中抑制TGFβ信號通路活性成分的篩選。

【結論與討論】

MLN具有抗肝纖維化的作用，其機制主要是通過抑制TGFβ-Smad 2/3信號通路抑制ECM的生成，玄參是MLN抗肝纖維化的主要成分，而AC、HPG和GPA可能是MLN抗肝纖維化的關鍵活性成分。

注：本文原創表明為原創編譯，非聲張版權，侵刪！

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