病毒病防控專家曾令兵：魚類病毒病防控技術和藥物研制有了新進展

淡水養(yǎng)殖業(yè)為保障國民蛋白質(zhì)來源、食物供給以及漁業(yè)增效、漁民增收發(fā)揮了不可替代的作用。然而，隨著我國淡水魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，養(yǎng)殖模式不斷增多，規(guī)模不斷增大，集約化程度不斷提高，養(yǎng)殖病害問題日趨突出，成為制約水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展的瓶頸因素之一。在淡水魚類病害中，尤以病毒性疾病危害最為嚴重，不僅流行范圍廣，傳播速度快，死亡率高，而且防控手段有限，給養(yǎng)殖業(yè)造成了重大經(jīng)濟損失。為此，筆者就病毒病防控、診斷方法及藥物研制進展情況專訪了大宗淡水魚產(chǎn)業(yè)技術體系病毒病防控崗位專家曾令兵研究員。

問：大宗淡水魚主要病毒性疾病的種類有哪些？危害情況如何？

答：目前，在我國養(yǎng)殖大宗淡水魚中造成嚴重危害的病毒性疾病主要有四種，分別是草魚出血病、鯉春病毒血癥、錦鯉皰疹病毒病、鯽造血器官壞死癥。

1.草魚出血病

草魚出血病是20世紀60年代末期我國發(fā)現(xiàn)的第一個魚類病毒性疾病，其病原為草魚呼腸孤病毒(GCRV)。草魚出血病流行范圍廣，在我國大部分省份均有草魚出血病發(fā)生，其傳播速度快，流行季節(jié)長，死亡率高達70%～80%，主要危害一齡草魚和二齡草魚魚種。近年的流行病學調(diào)查結果表明，大規(guī)格草魚魚種以及養(yǎng)殖草魚成魚亦有草魚出血病發(fā)生。患病草魚以體表出血、肌肉出血、腸道充血為主要癥狀。病原學研究表明，迄今在我國養(yǎng)殖草魚中已發(fā)現(xiàn)三種基因型草魚呼腸孤病毒，主要流行株以草魚呼腸孤病毒基因型II型為主。

2.鯉春病毒血癥

鯉春病毒血癥是一種急性出血和流行性敗血癥，主要感染鯉魚及其變種，是養(yǎng)殖鯉魚最為嚴重的病毒性疾病之一，其病原為鯉春病毒血癥病毒(SVCV)。鯉春病毒血癥一般在春季水溫8～20℃暴發(fā)，水溫13～15℃時是流行高峰，死亡率可達70%。我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《一、二、三類動物疫病病種名錄》中規(guī)定，將SVCV列為一類疫病。

3.錦鯉皰疹病毒病

錦鯉皰疹病毒病是一種嚴重感染養(yǎng)殖鯉魚、錦鯉和雜交鯉的傳染性病毒病，其病原為錦鯉皰疹病毒(KHV)，又稱鯉皰疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 2，CyHV-3)。錦鯉皰疹病毒病的發(fā)病水溫為16～30℃，患病鯉魚呈現(xiàn)暴發(fā)性死亡，感染種群患病率100%，死亡率70%～80%，有時可高達90%～100%，是近年來鯉魚和錦鯉養(yǎng)殖中最為嚴重的一種疾病。潛伏感染、水媒傳播是錦鯉皰疹病毒感染養(yǎng)殖鯉魚的重要特征，也是病原傳播的主要途徑。

4.鯽造血器官壞死癥

鯽造血器官壞死癥是近年來我國養(yǎng)殖鯽魚中暴發(fā)的一種嚴重的病毒性疾病，其病原為鯉皰疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2，CyHV-2)。鯉皰疹病毒II型主要感染觀賞魚金魚、養(yǎng)殖鯽魚及其變種，其流行范圍廣，傳播速度快，死亡率高，危害嚴重。異育銀鯽魚苗、魚種以及成魚對鯉皰疹病毒Ⅱ型敏感，死亡率高達90%以上。患病鯽魚以鰓絲充血、出血、胸腹鰭基部充血為典型特征。近年的CyHV-2監(jiān)測結果顯示，鯽造血器官壞死癥流行范圍存在不斷擴大的趨勢，鯽魚繁育苗種場CyHV-2檢測陽性樣本數(shù)量有所增加，暗示苗種帶毒以及病毒的潛伏感染特性是該疾病傳播的主要風險。

問：魚類病毒病發(fā)病原因與流行規(guī)律有哪些？

答：魚類病毒病發(fā)病原因與流行規(guī)律主要有以下方面：

1.發(fā)病原因

從大的方面分析，魚類病毒病的發(fā)病原因有內(nèi)在因素和外在因素兩個方面。在內(nèi)在因素方面，苗種質(zhì)量退化、抗病力下降以及苗種攜帶病毒病原與否，是疫病發(fā)生的重要內(nèi)在原因。在外在因素方面，包括病原、環(huán)境以及養(yǎng)殖操作三個方面。一是水產(chǎn)養(yǎng)殖因為環(huán)境的特殊性，病原生物絕大多數(shù)無處不在，是疫病發(fā)生的重要外在原因之一；二是養(yǎng)殖水環(huán)境惡化以及氣溫水溫等環(huán)境因素的變化，給養(yǎng)殖動物造成巨大環(huán)境壓力，導致養(yǎng)殖動物抵抗力下降，給病原生物提供感染機會，導致感染發(fā)生與疾病暴發(fā)；三是人為因素導致疾病發(fā)生，養(yǎng)殖過程中所有的養(yǎng)殖操作與健康管理措施如果缺乏科學性、合理性，不僅可以導致疾病發(fā)生，而且在疫病控制中因措施不當而導致疾病嚴重化。總之，大宗淡水魚病毒病的發(fā)生與宿主抗病力特性、病原生物感染致病特性、養(yǎng)殖環(huán)境變化情況以及養(yǎng)殖操作科學性、合理性等密切相關。

2.流行規(guī)律

池塘養(yǎng)殖魚類的病毒病主要在春、夏、秋等季節(jié)流行。鯉春病毒血癥病主要發(fā)生在春季，水溫8～20℃流行，水溫在13～15℃時為流行高峰，當水溫超過22℃就不再發(fā)病。鯉春病毒血癥病毒可感染各種規(guī)格的鯉魚，包括鯉魚魚苗、魚種和成魚。草魚出血病每年有兩個流行高峰期，第一個高峰期主要集中在5－6月份，水溫22～30℃時流行，水溫25～28℃為流行高峰，主要危害二齡草魚魚種；第二個流行高峰期在每年9－10月，主要危害當年草魚魚種。近年的流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn)，大規(guī)格草魚魚種以及草魚成魚也時有草魚出血病發(fā)生。錦鯉皰疹病毒病流行時間長，發(fā)病水溫范圍廣，10～33℃水溫均可發(fā)生，尤以22～28℃最為嚴重。錦鯉皰疹病毒病主要危害鯉魚魚種與成魚，在我國北方地區(qū)與中部地區(qū)發(fā)病嚴重，尤其是在鯉魚養(yǎng)殖后期，養(yǎng)殖池塘負荷增大，水質(zhì)變化大，水體溫度變化大，極易導致魚體應激而免疫力下降，促進魚體內(nèi)攜帶或潛伏感染的病毒增殖而導致疾病暴發(fā)，死亡速度快，損失嚴重。鯉皰疹病毒II型感染養(yǎng)殖鯽魚引起的鯽造血器官壞死癥是近年我們鯽魚主要養(yǎng)殖區(qū)域發(fā)生的一種傳染性疾病，其流行范圍逐漸擴大，傳播速度快，死亡率高。鯽造血器官壞死癥的流行水溫范圍為16～30℃，發(fā)病高峰期在春、秋兩季，水溫22～25℃。近年的流行病學檢測發(fā)現(xiàn)，鯉皰疹病毒II型也具有潛伏感染特性，部分鯽魚苗種場親魚、魚卵、魚苗攜帶病毒的情況較為普遍，進一步加劇了該病毒通過苗種途徑的快速傳播，其流行范圍有進一步擴大趨勢。

問：如何鑒別診斷魚類病毒病？

答：鑒別診斷魚類病毒病的方法為：

1.疾病癥狀

鑒于病毒病原與宿主之間的密切關系，疾病癥狀往往是判斷疾病種類最為直接的指標。依據(jù)疾病的癥狀，可以在第一時間內(nèi)較為準確地進行魚類病毒病的鑒別診斷。魚類主要病毒病的癥狀表現(xiàn)如下：

草魚出血病：患病草魚體色發(fā)黑，鰓蓋、下頜和鰭條基部充血。解剖可見肌肉、腸道充血，肝、脾、腎充血或失血。根據(jù)臨床癥狀可分為“紅鰭紅鰓蓋”“紅肌肉型”“腸炎型”三種類型。

鯉春病毒血癥：病魚體色變暗，眼突出，鰓發(fā)白，體表、鰭條基部和泄殖孔出血，腹脹或者水腫，泄殖孔突出，并拖有黏稠的糞。

錦鯉皰疹病毒病：患病魚體表發(fā)白或變紅，體表觸感粗糙，失去部分或全部表皮，體表和鰓黏液過度分泌，鰓發(fā)白。有些病魚眼球內(nèi)陷，體表和鰭條基部出血，鰭條壞死。

鯽魚造血器官壞死癥：患病鯽體色發(fā)黑，體表以廣泛性充血或出血為主要癥狀，尤其以鰓蓋、下頜、前胸和腹部最為嚴重。患病魚鰓絲腫脹，瀕死魚鰓血管易破裂而出血。病魚解剖后可見淡黃色或者紅色腹水，肝、脾、腎等器官腫大、充血，鰾壁出現(xiàn)點狀或斑塊狀充血。

2.實驗室診斷

魚類病毒病的實驗室診斷技術主要應用于疾病的確診，包括細胞培養(yǎng)、免疫診斷、分子診斷技術等，其中細胞培養(yǎng)與分子診斷應用最為普遍。

細胞培養(yǎng)分離病毒：通過收集患病魚組織，勻漿后超微過濾，感染相應敏感性細胞系，適當溫度培養(yǎng)后，感染細胞如出現(xiàn)典型細胞病變效應(CPE)，則可診斷為相應的病毒。

利用聚合酶鏈式反應(PCR)檢測：使用病毒特異性引物，以病毒基因組RNA或DNA作為模板進行RT-PCR或PCR檢測，如果擴增出目的條帶，則說明患病魚由病毒感染所致。

問：病毒病的防治措施有哪些？大宗淡水魚體系病毒病防控崗位在病毒病防控上做了哪些工作？

答：魚類病毒性疾病的防治是一個比較復雜的系統(tǒng)工程，養(yǎng)殖過程中的各環(huán)節(jié)都對疾病的發(fā)生有顯著影響。一般而言，投放不攜帶病毒的優(yōu)質(zhì)健康苗種、池塘清塘消毒殺滅病原體、水質(zhì)調(diào)控與科學投喂、適當?shù)乃幬锓乐闻c免疫預防，能較為有效地控制魚類病毒性疾病的發(fā)生與流行。具體而言，在投放苗種方面，要加強苗種產(chǎn)地檢驗檢疫，確保投放的魚苗魚種不攜帶致病性病毒病原，避免將病毒病原通過苗種引進途徑而輸入養(yǎng)殖場點，在投放魚種前，對魚體進行消毒處理，也是比較有效的控制病原輸入的方法。在清塘消毒方面，冬季養(yǎng)殖間歇期間，要采用陽光曝曬、藥物清塘等措施，盡可能殺滅淤泥或水體中的病毒病原，不僅清除傳染源，而且改善池塘底質(zhì)環(huán)境。在養(yǎng)殖過程中，控制水環(huán)境穩(wěn)定，避免池塘水體溫度劇烈變化，投喂優(yōu)質(zhì)飼料，切忌高溫期間過度投喂，可有效防止魚體因環(huán)境變化產(chǎn)生的應激或過度營養(yǎng)而導致免疫力、抵抗力下降，給病毒病原提供感染或快速增殖的機會，而導致疾病發(fā)生。在現(xiàn)階段的魚類養(yǎng)殖過程中，藥物防治技術依舊是控制其疾病發(fā)生的主要方法，適當?shù)乃幬镱A防與治療措施可以比較有效地控制魚類病毒病的發(fā)生。但是，在使用藥物的過程中，要避免外用藥物對池塘養(yǎng)殖環(huán)境穩(wěn)定的破壞作用以及內(nèi)服藥物對魚體的毒性作用，盡可能選用對養(yǎng)殖水體中浮游動、植物與益生微生物破壞作用小的藥物進行水體消毒，選用毒副作用小的藥物進行內(nèi)服，且避免長時間高劑量使用藥物。內(nèi)服藥物要多以刺激魚體免疫力、改善魚體代謝環(huán)境與提高魚體健康水平的多糖、維生素以及天然植物藥物，促進與提高魚體自身的免疫力與抗病力。其中天然植物抗病毒藥物，如大黃、板藍根、魚腥草、黃芪等，不僅具有明顯的抑制病毒復制增殖的能力，而且對于提高魚體免疫力有顯著作用。免疫預防技術代表了當今國際上防控水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病毒病的先進生產(chǎn)力，其效果顯著，持續(xù)時間長，對魚體與水環(huán)境無負面影響。目前我國已經(jīng)有草魚出血病疫苗批準生產(chǎn)，可應用于草魚出血病的免疫預防。

近些年來，在國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系“大宗淡水魚產(chǎn)業(yè)技術體系”病毒病防控崗位項目的支持下，本崗位團隊成員針對我國大宗淡水魚病毒病開展了流行病學調(diào)查，初步查明了其流行規(guī)律與發(fā)病原因；針對疾病的病原學、病理學與致病機理等，首次分離鑒定了草魚呼腸孤病毒基因型III型與鯉皰疹病毒II型病毒病，查明了其生物學特性、組織病理學特征與感染致病機理；在診斷方法方面，建立針對草魚呼腸孤病毒、鯉春病毒血癥病毒、錦鯉皰疹病毒、鯽造血器官壞死癥病毒的細胞培養(yǎng)病毒方法、電子顯微鏡鑒定方法以及分子生物學診斷方法10多種，其中，草魚呼腸孤病毒、鯉皰疹病毒II型LAMP可視化檢測技術已經(jīng)在生產(chǎn)中試驗應用。在抗病毒藥物篩選方面，建立了體外篩選抗病毒藥物的細胞模型，篩選出抗病毒化學藥物與天然植物藥物10多種，研制出天然植物抗病毒復方制劑；在大宗淡水魚病毒病疫苗制備與免疫預防技術研究方面，建立了草魚出血病細胞疫苗和酵母載體表達亞單位疫苗、鯉春病毒血癥病DNA疫苗、錦鯉皰疹病毒病細胞培養(yǎng)滅活疫苗、鯽造血器官壞死癥細胞滅活疫苗和酵母載體表達亞單位疫苗等的制備方法，建立了草魚腎臟組織細胞、鯽魚腦組織細胞以及病毒的規(guī)模化微載體培養(yǎng)技術，利用研制的疫苗，開展了持續(xù)多年的免疫預防試驗，在草魚出血病預防、鯽造血器官壞死癥預防等方面發(fā)揮了較大作用。

問：大宗淡水魚類病毒病防控今后的發(fā)展方向有哪些？

答：我國是世界性水產(chǎn)養(yǎng)殖大國，大宗淡水魚養(yǎng)殖占絕對支配地位。大宗淡水魚養(yǎng)殖業(yè)不僅為國民提供了豐富的蛋白質(zhì)食物來源，而且為我國農(nóng)村社會經(jīng)濟發(fā)展作出了重大貢獻。大宗淡水魚病毒性疾病問題已經(jīng)成為我國大宗淡水魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的瓶頸因素之一。因此，開展大宗淡水魚病毒病防控技術研究不僅具有重要的理論意義，而且具有極大的推廣應用前景。

參考國際上發(fā)達國家在水產(chǎn)養(yǎng)殖病毒病防治技術研究領域所取得的進展，結合我國當前大宗淡水魚病毒病的現(xiàn)狀，我們認為，未來我國大宗淡水魚類病毒病的發(fā)展動向應包括：

①在應用基礎理論研究方面，應注重疾病發(fā)生的內(nèi)在原因與流行規(guī)律研究，重點研究病毒病原與宿主相互作用機制、環(huán)境對宿主抵抗力的影響機制等問題，徹底查明疾病發(fā)生的原因與病毒病原的致病機理。

②在關鍵技術研究方面，應重點突破疫病的實用化診斷技術、水產(chǎn)藥物創(chuàng)制與安全使用技術、疫苗制備與免疫預防技術以及水產(chǎn)動物養(yǎng)殖管理與保健技術，切實落實疫病診斷技術在養(yǎng)殖現(xiàn)場的實用化問題，努力緩解水產(chǎn)專用藥物缺乏，主要借鑒或借用人藥或獸藥的局面，重點突破水產(chǎn)疫苗規(guī)模化制備與產(chǎn)業(yè)化應用的關鍵技術，建立系統(tǒng)的水產(chǎn)養(yǎng)殖水環(huán)境調(diào)控、科學投喂與健康管理保健技術體系，預防與控制疾病的發(fā)生。

③在產(chǎn)業(yè)化方面，重點推動大宗淡水魚病毒病實用化診斷技術產(chǎn)業(yè)化、水產(chǎn)疫苗商品化進程；加強大宗淡水魚免疫增強劑、代謝改良劑、水環(huán)境調(diào)控微生態(tài)制劑的生產(chǎn)應用；積極推動無特定疫病苗種場、良種場建設，加強無特定疫病苗種、預免疫苗種的生產(chǎn)與推廣應用工作，構建基于生物安保與健康管理的從源頭抓起的大宗淡水魚病毒病防控體系。

作者：中國水產(chǎn)科學研究院長江水產(chǎn)研究所，國家大宗淡水魚產(chǎn)業(yè)技術體系病毒病防控崗位 劉文枝 曾令兵

來源：科學養(yǎng)魚